人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞

真空冷冻干燥法  : :  :tongpaibio  

安瓿管的准备清洗
  选用中性玻璃材质的安瓿管。先用2%盐酸浸泡8～10小时，自来水冲洗至pH值为中性，再用蒸馏水洗2～3次，置烘箱中烘干备用。

人骨髓间充质干细胞HMSC细胞
人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞
人肺动脉平滑肌细胞HPASMC/STC-1细胞
人脐静脉内皮细胞HUV-EC-C细胞
肾小管内皮细胞HK2细胞
骨肉瘤细胞U-2OS细胞

冻干样品的制备
  斜面培养物的制备参照附录A，要求培养至成熟期或稳定期。无菌条件下将12%
的脱脂牛奶用无菌吸管注入到培养好的斜面中，用吸管刮取斜面上的菌体，使菌体均匀地悬浮在保护剂内，注意勿将培养基刮破，也不可使菌悬液产生较多的气泡，菌悬液中细胞浓度应不低于106个/mL。
用长的无菌毛细滴管将菌悬液分装到无菌的安瓿管内，每支分装0.1～0.2mL。操作时要把带有菌悬液的长毛细滴管直接插入安瓿管的底部，勿使菌液沾在管壁上。

预冻
  从制备菌悬液开始，经分装到进行预冻之间的时间不宜超过1小时。可采用以下几种方式预冻：分装完成后将安瓿管立刻放入－35～－40℃冰箱预冻1小时，使菌液*冻结。可采用分段式预冻，先将分装好的安瓿管置－20℃冻30分钟，再放入－80℃冰箱冻30分钟。采用离心式冻干装置时勿需预冻。

真空干燥
  预冻后将安瓿管放入真空箱中，开动真空泵进行干燥。采用无制冷设备的冻干装置，在开动真空泵后应使真空度在15分钟内达到66.5Pa，随后逐渐达到26.6～13.3Pa，在此条件下，样品将保持冻结状态，其中水分则不断升华，干燥才能顺利地进行。
采用离心式冻干装置，在安瓿管放于离心架上后，先开动离心机，再开动真空泵。当样品基本干燥后，真空度将达到2.67～4Pa，此时如冻干装置具有后干燥设备，则打开油扩泵，使样品进一步干燥1～2小时。
  使用具有温度控制设备的冻干装置，在冻干过程中当真空度达到26.6Pa时，样品中水分大量升华，这时可以开始加温，以便加速样品中水分升华。

标签
  激光打印机打印标签，标签上标明菌株编号和保藏日期，大小约为10×20mm，标签可插入管内或贴于管外，也可直接喷码在安瓿管表面，位置应距离管底约5mm左右，喷码要经160℃固定20分钟才能进行灭菌。

灭菌
  塞好棉塞，将同一菌号的安瓿管包在一起，121℃灭菌30分钟，备用。

保护剂的准备
  蒸馏水配制12%脱脂牛奶作为保护剂，每支试管分装2～5mL，加塞，再包一层牛皮纸捆好。灭菌锅加热至水沸腾，再将包好的试管放入灭菌锅内，113℃蒸汽灭菌20分钟。
打开放气阀缓慢排出蒸汽，气压降到0时打开灭菌锅，取出灭完菌的脱脂牛奶试管，迅速放入凉水中冷却。冷却后的脱脂牛奶试管于30℃培养2天，经无菌检查合格后备用。