外泌体培养基你选对了吗？

      外泌体（exosome）是一种由细胞内多泡体(multivesicular body，MVB) 与细胞膜融合后，分泌到细胞外基质中的膜性囊泡。在正常的生理过程中发挥着介导细胞间通讯的重要功能，可用于监测临床状态，治疗反应，疾病进展等，同时由于它们具有递送生物分子的功能，因此它们还有发展成临床药物递送载体的潜力。

外泌体产生于所有类型的动植物细胞，并且不同细胞、不同生长状态的细胞分泌的外泌体差异性很大，因此，为了得到更高浓度、异质性相对较小的外泌体，细胞培养上清是外泌体的最佳来源途径，细胞培养上清中外泌体浓度低、粒径小、粒径分布广（30-150nm，可能有大囊泡存在），实时定量监控外泌体分泌情况是工程化外泌体生产的重点也是难点。

纳米库尔特粒度仪（电阻法RPS）可在单颗粒水平对外泌体进行粒径浓度分析，可无标记直接检测任何培养基类型的细胞培养上清中的外泌体，精准得到外泌体样本中的完整、真实的粒径浓度分布，并且3-5分钟即可完成检测，是外泌体培养工艺开发中的得力助手，可助力筛选最佳的培养基以及培养条件。

01筛选无外源性培养基

传统的培养基都会用到牛血清以补充细胞所需营养，但血清会或多或少引入外源性的外泌体，从源头上造成了后续外泌体样本的污染。通过其他成分代替牛血清，或者经过分离除去外泌体，已经有各种类型的无外源性外泌体培养基上市，但都真正做到了没有污染吗？针对这种疑问，笔者选取了八种不同的声称无外源性外泌体的培养基进行测试。

图1.外泌体培养基测试

通过测试可见，并非所有的培养基都做到了真正的无外源性外泌体，还需擦亮您的眼睛，借助纳米库尔特粒度仪对其进行严格的筛选，挑选合适的培养基。

02培养条件优选

在通常的外泌体培养过程中，都是分离富集后再进行测定，若纯度过低或含量太少，不符合下游研发需求，则需要重新进行培养，消耗大量的时间成本;亟需一种准确、可靠和快速的方法实时监控细胞培养过程中外泌体的分泌含量，使科研工作事半功倍，纳米库尔特粒度仪十分符合这种应用场景，使外泌体的研发更高效。

图2.外泌体培养上清实时跟踪测试

在对某培养条件的细胞上清进行跟踪测试后发现，外泌体的浓度在培养第5天时达到峰值，往后浓度有所降低，并且粒径分布也有所变化。

总结：

纳米库尔特粒度仪（电阻法RPS）在外泌体生产工艺研发应用中有以下优势：

1.方便快捷，可以做到实时监测。

2.与样本折射率无关，可应对各种成分的培养基。

3.单颗粒检测，大小囊泡之间无互相影响，可得到真实的粒径分布数据。

4.直接检测外泌体体积粒径，粒径准确度媲美电镜。

5. 精准的浓度测量，可分析不同粒径范围内的颗粒浓度。