丙泊酚注射液乳粒粒径测定方法探讨

丙泊酚是一种脂溶性的、用于诱导和维持全身麻醉的短效静脉麻醉剂。1981年阿斯利康公司用大豆油作为载体，研制开发出脂肪乳剂的丙泊酚注射液，1986年，至今是丙泊酚载体中应用广泛的剂型。影响丙泊酚注射液临床使用安全性的主要指标之一就是粒径，主要包括平均粒径和不得检出的大粒径[1]。粒径测定有2种技术，第1种为动态光散射技术（DLS），第2种为基于米氏散射原理的经典光散射技术。根据这2种测定技术，市面有2种粒度测定仪，以美国PSS公司的动态激光粒度测定仪和英国马尔文公司、贝克曼库尔特的激光散射粒度测定仪为代表。由于原理不同，这2种粒度测定仪测定结果存在差异。

在国内丙泊酚注射液的生产企业中，部分企业质量标准中采用动态光散射法，较严格的限度为：平均粒径应为0.18～0.27μm，90％累计粒径不得过0.4μm，大于1μm的乳粒数不得过2％，并不得检出大于3μm的乳粒；另一部分企业照2010年版《中国药典》“粒度和粒度分布测定法”测定，限度各不相同，主要检查小于0.4～0.5μm与大于1μm、3μm或5μm的粒子数。本研究小组承担企业标准的统一工作，在此对本研究内容进行总结。

 2010年版《中国药典》（二部）附录ⅨE“粒度和粒度分布测定法”即文献[2]收载的是基于米氏散射原理的光散射法，未收载动态光散射法。所以本研究按《中国药典》的方法进行丙泊酚注射液乳粒粒径的测定，并根据《中国药典》的要求拟定限度。

 由于激光散射粒度测定仪光学参数的设置与供试品的粒度分布有关，粒径小于10μm的微粒（丙泊酚注射液大部分粒子的粒径在0.4μm以下）对系统折光率和吸光度的影响较大，必须对光学参数进行优化[3]。目前马尔文激光散射粒度测定仪的使用面较广，由于每个企业设置的仪器参数不一，测定结果不同，导致产品质量无可比性。现以丙泊酚注射液为模型药物，考察仪器参数的设置情况，以达到规范操作的目的，使各企业产品质量具有可比性。

1材料

1.1仪器

 MastersizerMS2000激光散射粒度测定仪（英国马尔文仪器有限公司）；Nicomp380型动态激光粒度测定仪（美国PSS公司）。

1.2药品与试剂

 丙泊酚注射液（来自德国贝朗制药有限公司、华瑞制药有限公司、四川国瑞药业有限责任公司、广东嘉博制药有限公司、西安力邦制药有限公司、浙江九旭制药有限公司共6个厂家13个批号产品，主要规格10ml∶100mg、20ml∶200mg、50 ml ∶ 500 mg 3种）；水为超纯水。

2 方法与结果
2.1 Mastersizer MS2000仪器参数的考察
2.1.1 遮光度的选择。6个生产厂家各自测定时所设定的遮光度值为5%～20%。本研究考察当吸收率和折射率参数相同的情况下，5%～20%的遮光度值对乳粒测定结果产生何种影响，5%～20%的任何值是否都是适宜的。
方法∶将马尔文公司的粒度测定仪的吸收率设为0.001，折射率设为1.52，通过在稀释液（纯水）中滴加丙泊酚注射液，调节遮光度分别为4.99%、10.04%、15.11%和20.02%时，乳粒粒径测定结果见表1。 

表1结果为∶随遮光度增加，平均粒径依次减小，残差依次增加。残差是仪器自动对实际测定的平均粒径与理论值的拟合度进行的评价，残差值越大说明拟合越差。乳粒测定项的设置目的是控制平均粒径过大，是评价工艺是否优良的一个手段。表1中遮光度为15.11%和20.02%时测得的平均粒径偏小（理论值0.2～0.3 μm），不利于对粒径的控制。
另，在马尔文公司的粒度测定仪的工作指南中关于遮光度的选择指南建议∶干法测定时将遮光度设为约5%，测定粒径小于3～4 μm的样品时将遮光度设为约10%，测定大于50 μm的样品时将遮光度设为约15%。而丙泊酚注射液中大部分乳粒的粒径均在0.4 μm 以下。
根据试验考察结果，结合马尔文公司的粒度测定仪的工作指南关于遮光度的选择指南中的建议，当遮光度设置为5%～10%的任意值，乳粒粒径测定结果无显著差异;而遮光度值大于15%时测得的平均粒径偏小，不利于对粒径的控制。因此建立的方法中遮光度可选择范围设为5%～10%。

2.1.2 吸收率的选择。马尔文公司的粒度测定仪吸收率的设置为1×10~"，即0、0.1、0.01、0.001……。6个生产厂家各自测定时所设定的吸收率值有0、0.001和 0.01。本研究考察当在遮光度和折射率参数相同的情况下，设置不同的吸收率对乳粒测定结果产生何种影响，是否0～0.1内的任何值都是适宜的。
方法∶将马尔文公司的粒度测定仪的折射率设为1.52，通过在稀释液（纯水）中滴加丙泊酚注射液，调节遮光度约为15%，考察吸收率分别为0、0.001、0.01和0.1时，乳粒粒径测定结果，见表1。即∶吸收率为0、0.001和0.01时，残差和平均粒径无差异;吸收率为0.1时，残差远远大于5%，说明测得的平均粒径严重偏离理论值。因此吸收率可选择范围为0～0.01。

2.1.3 折射率的选择。6个生产厂家各自测定时所设定的折射率值分别为1.47、1.52和1.57。本研究考察当在遮光度和吸收率参数相同的情况下，设置不同的折射率对乳粒粒径测定结果产生何种影响，是否1.47～1.57内的任何折射率值都是适宜的。
方法∶将马尔文公司的粒度测定仪的吸收率设为0.001，通过在稀释液（纯水）中滴加丙泊酚注射液，调节遮光度约为15%，考察折射率为1.47、1.52和1.57时，乳粒粒径测定结果见表1。即∶在遮光度和吸收率不变的情况下，折射率为1.47和1.52时测得的平均粒径和残差无差异;折射率为1.57时，平均粒径过大（>0.3 μm），明显偏离真实粒径。因此折射率可选择范围为1.47～1.52。

2.2 样品测定
根据仪器参数的考察结果及《中国药典》对乳剂粒度的要求吗，结合实际情况，拟定标准为∶取本品，照粒度和粒度分布测定法【2010年版《中国药典》（二部）附录ⅨE第三法】检查（若使用马尔文公司的粒度测定仪，建议参数为吸收率0～0.01，折射率1.47～1.52，遮光度5%～10%），平均粒径不得过0.4μm，大于1μm的乳粒不得过2%，并不得检出大于5μm的乳粒。
采用马尔文公司的粒度测定仪，设定遮光度为5%、折射率为1.47、吸收率为0.01，测定样品。结果，平均粒径为0.214～0.335μm，大于1μm和大于5μm的粒子均未检出。
13批样品采用经典光散射法测定的粒径结果见表2。

2.3动态光散射法与经典光散射法测定结果比较

前文已述，动态光散射法与经典光散射法对乳粒限度的规定主要差异在于对"平均粒径"及"90%累计粒径不得过0.4 μm"的描述。因此用动态光散射法（美国PSS公司的动态激光粒度测定仪）及经典光散射法（英国马尔文公司的激光粒度测定仪）分别测定各企业样品，对这2项结果进行比较。结果显示动态光散射法测得的平均粒径普遍小于经典光散射法测得的结果，测得的小于0.4 μm粒子的百分比普遍大于经典光散射法测得的结果，详见表3。

 3 讨论
（1）《美国药典》35版"附录<729>项收载了粒径测定的2 种光散射技术，即DLS和基于米氏散射原理的经典光散射技术，并说明这2种技术都可以使用，能获得可接受的结果。笔者经过对这2种技术测定结果的比较，发现测得的平均粒径及小于0.4 μm的粒子的百分数有较大差异。因此，采用不同的测定原理，可能要设置不同的限度。因此，统一药品标准，明确乳粒测定的方法、统一限度，才能使各生产企业的产品具有可比性。
（2）目前，即使同样使用经典光散射技术的马尔文公司的激光粒度测定仪，由于各企业设置的仪器参数不同，可致测定结果不同，导致产品质量无可比性。为了甄别哪些参数的差异会对结果产生影响，哪些参数的差异不会对结果造成影响，或者多大的差异才会影响结果，本次研究对3个主要的仪器参数进行了考察。终确定了仪器参数的范围为∶遮光度5%～10%、折射率1.47～1.52、吸收率0～0.01。在此范围内的参数设置，对测定结果无影响。
（3）本研究以丙泊酚注射液为示范，对乳粒粒径测定的方法及仪器参数的设置进行了初步探讨，为今后研究类似品种如脂肪乳注射液及中长链脂肪乳注射液等的乳粒粒径测定提供了研究方向及思路。参考文献
【1】 彭娅，贾飞，程刚.丙泊酚及其制剂的研究进展【J】.中国药
剂学杂志，2012，10（1）∶17.
【2】 国家药典委员会.中华人民共和国药典∶二部【S】.2010年
版.北京∶中国医药科技出版社，2010∶2、附录74.
【3】 杨道媛，马成良，孙宏魏，等.马尔文激光粒度分析仪粒度
检测方法及其优化研究【J】.中国粉体技术，2002，8（5）∶27.
[4] The United States Pharmacopoeia Convention.USP35-NF
30[S]. Baltimore:United Book Press,Inc.,2011:1310.
（收稿日期∶2013-01-23 修回日期∶2013-03-26）