检测炭疽免疫电化学与磁珠免疫荧光法

ECLIA基于电极表面Ru（bpy）2+3标记抗体与过量TPA反应产生光子的氧化还原反应原理。整个反应发生于磁珠与正极附近区域内。炭疽芽孢杆菌检测范围为102一104CFU。捕获抗体通过生物素2链亲和素作用固定于磁珠表面。MPFIA应用抗体包被的磁珠作为固相基质，悬浮于溶液中，供菌体捕获，整个反应在微孔板中进行。这样捕获抗体一细菌一碱性磷酸酶标记抗体形成夹心，后者又作为报告者与碱性磷酸酶底物At-tophosTM发生反应，产生荧光，从而达到检测之目的。ECLIA较MP-FIA敏感性至少高10倍。二者与传统的ELISA相比优势在于：

①磁珠表面积大，抗体固定密度高；

②磁珠悬浮于溶液中，加快抗原-抗体反应速度；

③临床和生物样品中靶细菌可直接被捕获、分离，甚至在磁珠表面浓缩。

免疫检测方法为研制炭疽芽孢杆菌检测仪器提供了较大的空间，但还受到抗体数目、自然和基因工程变异的限制。大多数免疫学检测方法灵敏度尚不能满足军事上1～100个细菌的需要。Dang等研究了芽孢灭活方法对检测的影响。在直接ELISA中，无论是用多抗，还是用单抗，检测丁射线灭活芽孢的信号都降低了近50％，而对高压灭活的芽孢，用单抗检测信号降低了83％，用多抗检测信号增加了3倍，说明多抗以可溶性抗原-抗体为主，而单抗结合位点对高压和丁射线均敏感。由此可见，不同芽孢灭活方法影响着核酸与免疫学检测结果，在比较不同实验室结果时需加以考虑。在标本处理时，需考虑死芽孢与活芽孢的检测对比问题，尤其是在高度可疑而检测阴性时，一定要进行检测活芽孢试验的对比。这一试验还证明了灭活的芽孢检测不会导致假阳性。